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花生四烯酸乙醇氨(AEA)ELISA检测试剂盒
起订量(盒)价格
1-51680 /盒
≥51480 /盒
  • 品牌:广州奥瑞达生物
  • 产地:AEA
  • 型号:48T/96T
  • 货号:ARD
  • 发布日期: 2023-11-02
  • 更新日期: 2024-02-24
产品详请
产地 AEA
保存条件 2-8℃防潮避光
品牌 广州奥瑞达生物
货号 ARD
检测方法 竞争法
保质期 6个月
规格 48T/96T
适应物种 人,小鼠,大鼠,猪牛羊,鸡鸭鹅,鱼等
检测限 参考说明书
数量 150
用途范围 仅用于科研实验,不得用于临床诊断
标记物 详见说明书
样本 血清,血浆,组织匀浆液,细胞培养上清液
应用 科研实验,环保,生物产业,农业
是否进口

花生四烯酸乙醇氨(AEA)ELISA检测试剂盒 检测原理

试剂盒采用竞争法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被花生四烯酸乙醇氨抗原的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的竞争抗原,经过温育并C底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的花生四烯酸乙醇氨(AEA)呈负相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

花生四烯酸乙醇氨(AEA)ELISA检测试剂盒 样品收集、处理及保存方法

1.  血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

花生四烯酸乙醇氨(AEA)ELISA检测试剂盒 自备物品

1.酶标仪(450nm)

2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

花生四烯酸乙醇氨(AEA)ELISA检测试剂盒 操作注意事项

1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

3. 按照说明书操作时样本已经稀释5倍,Z终结果乘以5才是样本实际浓度。

4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5. 所有液体组分使用前充分摇匀。

花生四烯酸乙醇氨(AEA)ELISA检测试剂盒 试剂盒组成

名称

96孔配置

48孔配置

备注

微孔酶标板

12孔×8条

12孔×4条

标准品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

样本稀释液

6mL

3mL

竞争抗原-HRP

6mL

3mL

20×洗涤缓冲液

25mL

15mL

按说明书进行稀释

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

终止液

6mL

3mL

封板膜

2张

2张

说明书

1份

1份

自封袋

1个

1个

注:标准品(S0-S5)浓度依次为:0、10、20、40、80、160 ng/ml

花生四烯酸乙醇氨(AEA)ELISA检测试剂盒 试剂的准备

20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

花生四烯酸乙醇氨(AEA)ELISA检测试剂盒 洗板方法

1. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。

2. 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

花生四烯酸乙醇氨(AEA)ELISA检测试剂盒 操作步骤

1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

3. 样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。

4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的竞争抗原50μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

花生四烯酸乙醇氨(AEA)ELISA检测试剂盒 结果判断

1. 15分钟内在波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值;

2. 百分结合率计算:设S0管计数为B0,各标准管或样品管计数为B,非特异管计数为NSB,则百分结合率计算公式如下:B/B0=(B-NSB)/(B0-NSB)×百%

3.  logit计算:各标准点或样品管的logit值计算公式如下:logit=ln(B/B0)/(1-B/B0)

4. 将标准品的OD均值与标准品0点的OD均相除,为标准点的百分结合率,在log-logit坐标纸上绘图。

5.  Log-logit双对数标准曲线:坐标纸上横轴从左至右D一个1-9表示为D一个10进位,D二个1-9表示为D二个10进位。D三个1-9表示为D三个10进位。坐标纸纵轴为百分比(1-99),即各标准吸光值的百分结合率。取一条通过各点的直线。要求尽可能多的点在线上,同时剩余的点均匀分布在直线的两边。样品也同样由吸光值计算百分结合率,再从纵轴上的相应结合率找到直线上的点,此点对应的横坐标浓度即为样品的浓度,无须换算。

6. 人工处理:以标准浓度取log值为横坐标,对应的logit值为纵坐标在普通坐标纸上或以标准浓度为横坐标,对应的B/B0为纵坐标在logit-log坐标纸上画出标准曲线(理想化时是一条直线)。根据待测样

品的B/B0可以从坐标纸上查出样品的浓度值。如果使用普通坐标纸,查出的数值应取反对数才是z后的浓度值。

7. 自动处理:使用logit-log或四参数数据处理模式,由电脑自动计算得出结果。

8.  敏感度:1.0 ng/ml

9.  图例

花生四烯酸乙醇氨(AEA)ELISA检测试剂盒 试剂盒性能

1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。

2. 灵敏度:z低检测浓度小于1.0 ng/ml。

3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。

5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。

6. 有效期:6个月

花生四烯酸乙醇氨(AEA)ELISA检测试剂盒 免责声明

1. 试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。

2. 严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。